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L929細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞株
公司所提供的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞及其子代,不能用于人體實(shí)驗(yàn)和臨床診斷、治療。
細(xì)胞狀態(tài)不好解決方法:培養(yǎng)基一次不要配太多,根據(jù)用量決定。
細(xì)胞外源微生物的污染:細(xì)胞不宜長(zhǎng)期體外培養(yǎng),因?yàn)橥庠次⑸镂廴镜膸茁蚀蟠筇岣摺R装l(fā)現(xiàn)和難發(fā)現(xiàn)的,影響細(xì)胞狀態(tài)。
建議:實(shí)驗(yàn)前凍存一批細(xì)胞,隔幾個(gè)月重新復(fù)蘇。既保證實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞代數(shù)*,又將外源污染的后果降到zui低。
致電或電聯(lián) 咨詢L929細(xì)胞的傳代次數(shù)、報(bào)價(jià)、以及技術(shù)咨詢、L929細(xì)胞的說(shuō)明書(shū)等等。
相關(guān)培養(yǎng)液原料()
1640培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)11875093) +10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+2mM L-G(L-谷氨酰胺)+1mM Sodium pyruvate+10mM HEPES(gibco.。貨號(hào)。15630-080)
DMEM高糖培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)11995065)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+4mM L-G(L-谷氨酸胺)+1mM (丙酮酸鈉1,HEPES(gibco.。貨號(hào)。15630-080)
E,MEM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)11095080)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+NEAA(非必需氨基酸)+2mM L-G(L-谷氨酸胺)+1mM (丙酮酸鈉)
F12K培養(yǎng)基 (GIBCO,貨號(hào)11765054)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+2mM L-G(L-谷氨酸胺)
McCoy's 5a培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)16600082)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+1.5mM L-G(L-谷氨酸胺)
L 15培養(yǎng)基(Hyclone,貨號(hào)SH30525.01)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+1.5mM L-G(L-谷氨酸胺)
DMEM/F12培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)11330032)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+1.5mM L-G(L-谷氨酸胺)
IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)C12440500BT)+10%進(jìn)口胎牛血清(GIBCO,貨號(hào)10099141)+1.5mM L-G(L-谷氨酸胺)
L929細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞株 步驟:
(一)凍存
1、消化細(xì)胞(同實(shí)驗(yàn)二),將細(xì)胞懸液收集至離心管中。
2、1000rpm離心10分鐘,棄上清液。
3、沉淀加含保護(hù)液的培養(yǎng),計(jì)數(shù),調(diào)整至5×106/ml左右。
4、將懸液分至凍存管中,每管1 ml。
5、將凍存管口封嚴(yán)。如用安瓿瓶則火焰封口,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。
6、貼上標(biāo)簽,寫(xiě)明細(xì)胞種類(lèi),凍存日期。凍存管外拴一金屬重物和一細(xì)繩。
7、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→低溫冰箱(-30℃ 1小時(shí))→氣態(tài)氮(30分鐘)→液氮。
注意:操作時(shí)應(yīng)小心,以免液氮凍傷。液氮定期檢查,隨時(shí)補(bǔ)充,不能揮發(fā)干凈,一般30立升的液氮能用1~1.5月。
(二)復(fù)蘇
1、準(zhǔn)備一個(gè)茶缸或1000ml的燒壞,內(nèi)裝2/3杯37℃的溫水。
2、從液氮中取出凍存管、迅速置于溫水中并不斷攪動(dòng)。使凍存管中的凍存物在1分鐘之內(nèi)融化。 3、打開(kāi)凍存管,將細(xì)胞懸液吸到離心管中。 4、1000rpm離心10分鐘,棄去上清液。
5、沉淀加10ml培養(yǎng)液,吹打均勻,再離心10分鐘,棄上清液。
6、加適當(dāng)培養(yǎng)基后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中,37℃培養(yǎng),第二天觀察生長(zhǎng)情況。
L929細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞株 相關(guān)主要產(chǎn)品:
鵪鶉?yán)w維肉瘤細(xì)胞株QT6
小鼠骨髓瘤B淋巴細(xì)胞株SP2/MIL-6
小鼠胰腺癌細(xì)胞株LTPA
小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝株P(guān)T-67
小鼠淋巴瘤細(xì)胞株L5178YTK+/-clone3.7.2C
小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株MA-891
小鼠胃癌細(xì)胞株MFC
鼠肝癌細(xì)胞株MM45T.Li
小鼠肝癌細(xì)胞株Hepa1-6
小鼠胸腺瘤細(xì)胞株EL4
小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞株9L
小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞株RAW264.7
小鼠肝癌細(xì)胞株hepA1-6
小鼠垂體瘤細(xì)胞株AtT20
小鼠乳腺癌細(xì)胞株C127
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-121
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-1752
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-64
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-70
大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株C6-D2B
小鼠肺癌Lewis瘤株
小鼠肺腺癌細(xì)胞株LA795
小鼠胰腺腺泡細(xì)細(xì)胞株MPC-83
小鼠胰腺腺泡細(xì)胞株MPC-83瘤株
小鼠β胰島素瘤細(xì)胞株RIN-m5F
小鼠乳腺癌細(xì)胞株MA891
小鼠自發(fā)高乳腺癌細(xì)胞株TA2
小鼠宮頸癌細(xì)胞株U14
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株G422
小鼠腹水瘤S180瘤株
小鼠白血病細(xì)胞株C3
小鼠淋巴瘤細(xì)胞株YAC-1
小鼠肺上皮細(xì)胞株TC-1
大鼠肉瘤細(xì)胞株WistarW256
小鼠巨噬細(xì)胞株Ana-1
小鼠小膠質(zhì)瘤細(xì)胞株Bv-2
大鼠胰島素瘤細(xì)胞株INS-1
大鼠肺泡巨噬細(xì)胞株NR8383
小鼠單核巨噬細(xì)胞株J774A.1
大鼠胰腺癌細(xì)胞株DSL-6A/C1
L929細(xì)胞,小鼠成纖維細(xì)胞株 試劑和器材
器材:液氮罐、凍存管(塑料螺口凍存管或安瓿瓶)、離心管、吸管、離心機(jī)等 試劑:0.25%胰酶、培養(yǎng)基、含保護(hù)劑的培養(yǎng)基(即凍存液) 凍存液配制: 培養(yǎng)基加入甘油或DSMO,使其終濃度達(dá)5—20%。保護(hù)劑的種類(lèi)和用量視不同細(xì)胞而不同。配好后4℃下保存。
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