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              Capan2細胞

              發(fā)布時間:2016-05-19瀏覽:979次

              Capan2細胞

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              進口胎牛血清|Gibco血清|BOVOGEN血清|SERANA血清

              常規(guī)細胞培養(yǎng)方法

              初代培養(yǎng)

              原理

              將動物機體的各種組織從機體中取出,經各種酶(常用胰蛋白酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理,分散成單細胞,置合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細胞得以生存、生長和繁殖,這一過程稱原代培養(yǎng)。    

              儀器、材料及試劑

              儀器:培養(yǎng)箱(調整至37),培養(yǎng)瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術器械、血球計數板、離心機、水浴箱(37

              材料:動物組織塊

              試劑:1640培養(yǎng)基(含20%小牛血清),0.25%胰酶,Hank′s液,碘酒

              初代消化培養(yǎng)法

              1.準備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

              2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。

              3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

              4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結扎瓶口或塞以膠塞。

              5.消化:或用恒溫水浴,或置于37溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

              6.分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

              7.計數:用計數板計數,如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調整。

              8.培養(yǎng):置于36.5溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。

              我們實驗室細胞傳代的一般方法

              這一方法較簡單,不需要離心,而且消化后細胞很少聚集成團,具體步驟如下:

              1、吸盡待傳代細胞瓶內的培養(yǎng)液,按11 的比例加入適量0.25%胰酶和0.0 2EDTA(一般100ml培養(yǎng)瓶各加2滴管消化(消化時不要晃動培養(yǎng)瓶,以免消化不*而導致細胞成片脫落,從而導致細胞成團,無法吹散)。

              2、消化致細胞變圓,細胞相互脫離接觸但還未從瓶壁脫落時,吸盡胰酶和EDTA。

              3、利用殘留的胰酶和EDTA繼續(xù)消化數分鐘。

              4、加入適量培養(yǎng)液,反復吹打,然后分別接種致新的培養(yǎng)瓶。

              注:消化的時間需根據不同細胞摸索確定。

              ACC-2人涎腺腺樣囊性癌細胞

              ACC-3人腺樣囊性癌

              ACHN人腎透明細胞癌細胞

              AE-1雜交瘤細胞抗AChE

              AE-2雜交瘤細胞抗AChE

              AGS人胃腺癌細胞

              AN3CA人子宮內膜腺癌細胞

              ANA-1小鼠巨噬細胞

              ARO甲狀腺癌細胞(未分化)

              AsPC-1人轉移胰腺腺癌細胞

              ATT-20小鼠垂體瘤

              B16小鼠黑色素瘤細胞

              B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細胞

              B95-8絨猴EBV轉化的白細胞

              BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細胞

              Bcap-37人乳腺癌

              BEL-7402人肝癌

              BEL-7404人肝癌

              BEL-7405人肝癌

              Beta-TC-6小鼠胰島素瘤胰島β細胞

              BGC-823低分化胃腺癌

              BHK-21 [C-13]倉鼠腎成纖維細胞

              BIU-87人膀胱癌細胞

              BMSC人骨髓間充質干細胞

              BNL CL.2小鼠胚胎肝細胞

              BRL大鼠肝細胞

              BRL 3A大鼠肝細胞

              BT-20人乳癌

              BT-325人腦多形性膠質瘤細胞

              BT474人乳腺導管癌細胞

              BT-549人乳腺管癌細胞

              BxPC-3人原位胰腺腺癌細胞

              C127小鼠乳腺腫瘤細胞

              C200人卵巢癌

              C26小鼠結腸癌

              C2C12小鼠成肌細胞

              C-33 A人子宮頸癌

              C3H小鼠胚胎成纖維細胞

              C6大鼠腦膠質瘤細胞

              Ca Ski人宮頸癌腸轉移細胞

              Caco-2人結直腸腺癌細胞

              CaKi-1人腎透明細胞癌細胞

              CaKi-2人腎透明細胞癌細胞

              CAL-27人舌鱗癌細胞

              Calu-1人肺癌細胞

              Calu-3人肺腺癌 (胸水)

              Calu-6人退行性癌細胞

              CaOV3人卵巢癌細胞

              Capan1人胰腺癌細胞

              Capan2人胰腺癌細胞

              CaSki人宮頸腸轉移癌細胞

              CBRH-7919大鼠肝癌細胞

              CCD-1095Sk人乳腺浸潤性導管癌旁皮膚細胞

              CCRF-CEM人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞

              CEM/C1人急性淋巴細胞白血病細胞

              CFPAC-1人胰腺癌細胞

              Chang liver人張氏肝細胞

              CHL倉鼠肺細胞

              CHO中國倉鼠卵巢細胞

              CHO/dhFr倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷

              CHO-K1倉鼠卵巢細胞亞株

              CL1人前列腺癌

              CCRF-CEM人鼻咽癌細胞

              CNE-2人鼻咽癌細胞

              COLO 205人結腸癌細胞

              COLO 320DM人結直腸腺癌細胞

              COLO-704人卵巢癌細胞

              COLO720E人卵巢癌細胞

              COS-1非洲綠猴SV40轉化的腎細胞

              COS-7非洲綠猴SV40轉化的腎細胞

              COV362人卵巢癌細胞

              COV434人卵巢癌細胞

              COV504人卵巢癌細胞

              COV644人卵巢癌細胞

              CRFK貓腎細胞

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