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              ACHN細胞株

              發(fā)布時間:2016-05-19瀏覽:833次

              ACHN細胞株

               

              準備工作

              準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。

              取材

              在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗?zāi)康亩ǎ?jīng)過一定的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng),實際上幼體組織(尤其是胚胎組織)比成年個體的組織容易培養(yǎng),分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng),腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理,盡快培養(yǎng),因故不能馬上培養(yǎng)時,可將組織塊切成黃豆般大的小塊,置4的培養(yǎng)液中保存。取組織時應(yīng)嚴格保持無菌,同時也要避免接觸其他的有害物質(zhì)。取病理組織和皮膚及消化道上皮細胞時容易帶菌,為減少污染可用抗菌素處理。

              培養(yǎng)

              將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如系組織塊培養(yǎng),則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部,幾個小時后組織塊可貼牢在底部,再加入培養(yǎng)基。如系細胞培養(yǎng),一般應(yīng)在接入培養(yǎng)器皿之前進行細胞計數(shù),按要求以一定的量(以每毫升細胞數(shù)表示)接入培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細胞進入培養(yǎng)器皿后,立即放入培養(yǎng)箱中,使細胞盡早進入生長狀態(tài)。

              正在培養(yǎng)中的細胞應(yīng)每隔一定時間觀察一次,觀察的內(nèi)容包括細胞是否生長良好,形態(tài)是否正常,有無污染,培養(yǎng)基的PH 是否太酸或太堿(由酚紅指示劑指示),此外對培養(yǎng)溫度和CO2 濃度也要定時檢查。

              一般原代培養(yǎng)進入培養(yǎng)后有一段潛伏期(數(shù)小時到數(shù)十天不等),在潛伏期細胞一般不分裂,但可貼壁和游走。過了潛伏期后細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底后要進行傳代培養(yǎng),將一瓶中的細胞消化懸浮后分至兩到三瓶繼續(xù)培養(yǎng)。每傳代一次稱為一代。二倍體細胞一般只能傳幾十代,而轉(zhuǎn)化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉(zhuǎn)化細胞可能具有惡性性質(zhì),也可能僅有不死性(Immortality)而無惡性。培養(yǎng)正在生長中的細胞是進行各種生物醫(yī)學(xué)實驗的良好材料。

              凍存及復(fù)蘇

              為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,zui終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間幾乎是無限的。

              復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

              凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復(fù)蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。

               

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              KB人口腔表皮樣癌細胞

              KG1a人髓系白血病細胞

              KM-12人大腸癌細胞

              KM202L人卵巢癌細胞

              KP1人胰腺癌細胞

              KP2人胰腺癌細胞

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              L-02人正常肝細胞

              L1210小鼠白血病細胞

              L5178Y 小鼠淋巴瘤細胞

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              L929小鼠成纖維細胞

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              Lec1倉鼠卵巢細胞

              LECPα-1 人肺癌細胞

              Lewis小鼠肺癌細胞

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              LoVo人結(jié)腸癌細胞

              LS-174-T人結(jié)腸腺癌細胞

              LTEP-A2人肺腺癌

              LX-2人肝星形細胞

              MA-104恒河猴腎細胞

              MC3T3-E1小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14

              MC3T3-E1 Subclone 14小鼠顱頂前骨細胞亞克隆14

              MCF-10A人正常乳腺上皮細胞

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              MR1中國倉鼠X小鼠B淋巴細胞雜交瘤

              MRC-5人胚肺細胞

              MS1小鼠胰島內(nèi)皮細胞

              MS751人子宮頸表皮癌細胞

              MSTO-211H人肺癌細胞株

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              NAMALWABurkitt's淋巴瘤細胞

              NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞

              NCI-H1395人肺腺癌細胞

              NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞

              NCI-H1975人肺腺癌細胞

              NCI-H2452人間皮瘤細胞

              NCI-H292人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)

              NCI-H358人非小細胞肺癌細胞

              NCI-H446人小細胞肺癌細胞

              NCI-H460人大細胞肺癌細胞

              NCI-H661人大細胞肺癌細胞

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              NCI-N87人胃癌細胞

              NCTC clone 929小鼠成纖維細胞

              Neuro-2a小鼠腦神經(jīng)瘤細胞

              NIH/3T3小鼠胚胎細胞

              NIH-3T3-L1小鼠胚胎成纖維細胞(前脂肪)

              NIT-1β小鼠胰島素瘤β細胞

              NP69人永生化鼻咽上皮細胞系

              NR8383大鼠肺泡巨噬細胞

              NRC-5人胚肺

              NRK大鼠腎細胞

              NRK-52E大鼠腎細胞

              OC3人卵巢癌細胞株

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              OKT 11雜交瘤細胞抗CD2

              OKT 3雜交瘤(CD3)

              OP9小鼠骨髓基質(zhì)細胞

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              P388D1小鼠淋巴樣瘤細胞

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