3T3-L1細(xì)胞 @慧穎細(xì)胞庫(kù) 培養(yǎng)注意事項(xiàng)

有的老師在培養(yǎng)3T3-L1細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)都粘附著長(zhǎng)在一起，平常狀態(tài)下看起來(lái)也會(huì)像長(zhǎng)滿融合了一樣?；鄯f技術(shù)人員對(duì)此總結(jié)了下3T3-L1細(xì)胞傳代步驟以及培養(yǎng)注意事項(xiàng)，僅供各位老師參考：

傳代步驟：

以用10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)的3T3-L1細(xì)胞為例：

    1）待培養(yǎng)皿中的細(xì)胞生長(zhǎng)至密度為95-100%時(shí)，棄細(xì)胞培養(yǎng)基，并加入5ml 1×PBS輕晃洗滌一次；

  2）棄1×PBS，加入1ml胰酶，搖勻使所有的細(xì)胞均被胰酶覆蓋后37℃消化1~2min，顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓并從平皿上脫落下來(lái)即為消化*；

  3）加入3ml新鮮的DMEM培養(yǎng)基（含10%FBS，1%雙抗），終止胰酶消化，并將形成的細(xì)胞懸液吹打混勻；

  4）按實(shí)驗(yàn)需要取細(xì)胞懸液接種到新的10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿內(nèi)，并用DMEM培養(yǎng)基補(bǔ)足體積至10ml，按十字形的方式搖勻后，置于CO2培養(yǎng)箱37℃條件下繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1）不要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行頻繁的傳代處理，傳代時(shí)，細(xì)胞密度已生長(zhǎng)至85%以上；

  2）3T3-L1貼壁不是十分牢，禁止培養(yǎng)過(guò)程中頻繁地移動(dòng)；

  3）消化時(shí)間不要超過(guò)兩分鐘，不要消化過(guò)頭，消化過(guò)程中，可以在顯微鏡下觀察，細(xì)胞變圓后，輕拍培養(yǎng)皿，如細(xì)胞可以呈流沙狀流動(dòng)，即可立即終止消化；

  4）終止消化后，細(xì)胞輕輕吹打10~20次即可，不要太用力吹打或者吹打太多次，盡量減少機(jī)械傷害。

5）傳代時(shí)接種的細(xì)胞量不要太少，否則容易生長(zhǎng)緩慢或者長(zhǎng)不動(dòng)，傳代比例1:3~1:8。

6）如細(xì)胞狀態(tài)還是比較差，可嘗試在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的丙銅酸鈉或谷氨酰胺（如1%）。

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