HIV-1 p24抗原 ELISA檢測試劑盒說明書

本試劑盒采用夾心法原理檢測人血清/血漿、培養(yǎng)物上清中的HIV-1 p24抗原，預(yù)先采用p24單克隆抗體包被固相微孔板。若樣本中含有HIV-1 p24抗原，則與包被板結(jié)合，再加入生物素（Biotin，Btn）標(biāo)記p24多克隆抗體，反應(yīng)后再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素（SA-HRP），結(jié)合形成夾心復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，加入HRP底物液，讀數(shù)測量，根據(jù)臨界值判斷樣本中是否含有HIV-1 p24抗原。

[試劑組分]

1. 包被板：包被有抗HIV -1 p24抗體的96孔酶標(biāo)板， 2～8℃保存。
2. 陰性對照：1.0mL/瓶；含正常人血清，防腐劑和色素，2～8℃保存。
3. P24抗原陽性對照：1.0mL/瓶×1瓶；含基因工程P24抗原的人血清，防腐劑和色素，2～8℃保存。
4. 結(jié)合物1：含有生物素標(biāo)記的P24多克隆抗體（Btn-P24抗體）
5. 結(jié)合物2：含有辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（SA-HRP）
6. 底物液A：
7. 底物液B：
8. 終止液：
9. 濃縮洗滌液：
10. 封板膜：
11. 說明書：1份。

[操作程序]

1. 實驗設(shè)計：將包被板從密封袋中取出，根據(jù)所需數(shù)量在板架上放好微孔板條。設(shè)空白對照一孔，陰性對照兩孔，P24抗原陽性對照2孔，HIV抗體陽性對照2孔。
2. 加結(jié)合物1：每孔加入結(jié)合物1  25μL。
3. 加樣：依次加入樣品、陰性對照、P24抗原陽性對照75μL。
4. 溫育：用微量震蕩器充分振蕩混勻，用封板膜封蓋反應(yīng)板，37℃溫育60分鐘；

5． 洗板：撕去封板膜，吸干微孔板中所有液體，每孔加入稀釋好的洗滌液400μL，浸泡至少30秒，吸干。如此洗板5次，zui后在干凈的吸水紙上拍干。

1. 加酶：空白孔除外，每孔加入結(jié)合物2   100μL。
2. 溫育：用新的封板膜封蓋反應(yīng)板，37℃溫育30分鐘。
3. 洗板：撕去封板膜，如上述洗板方法洗滌5次，zui后在干凈的吸水紙上拍干。

9． 加底物液： 每孔加入底物液A 50μL，底物液B 50μL，用微量震蕩器充分振蕩混勻，37℃避光溫育15分鐘。

10． 加終止液：每孔加入終止液50μL。

1. 檢測：雙波長測量