Caco2結腸癌細胞系（株）傳代基本技術

1. 選用細胞生長狀態(tài)好（80－90％），生長數量大于5×105 的細胞進行傳代。

2. 吸除細胞培養(yǎng)液。用含雙抗的1×PBS（pH7.4）清洗細胞培養(yǎng)瓶2 次。加入1ml 消化液至細胞培養(yǎng)瓶，輕輕搖動，使細胞消化液剛剛覆蓋細胞表面。注：消化液配比為：0.25％胰蛋白酶＋0.02％EDTA。

4. 將細胞培養(yǎng)瓶置于5%CO2、95%空氣、37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)數分鐘后，在顯微鏡下觀察細胞的消化狀態(tài)。

注意：若貼壁細胞逐漸趨于圓形、部分懸浮后，即可用手指輕輕拍打細胞培養(yǎng)瓶側部或底部使大部分貼壁細胞脫落，之后立即加入細胞終止液，終止細胞消化。每種細胞的消化時間有差異，消化時注意觀察，不要消化太久。

5. 吹打培養(yǎng)瓶中懸浮細胞若干次，吸出細胞懸浮液，轉入15ml 離心管中，

1000rpm 離心5 分鐘。

6. 棄離心管中上清液，加入細胞培養(yǎng)液重懸細胞。細胞計數，確定細胞數量。

7. 細胞分瓶后，加入適量細胞培養(yǎng)液至細胞培養(yǎng)瓶中，置于5%CO2、95%空氣、37℃ 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)24 小時。

來源：慧穎生物實驗室

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