CTLL-2細(xì)胞|CTLL-2細(xì)胞株 培養(yǎng)說(shuō)明

一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

產(chǎn)品名稱(chēng)：CTLL-2細(xì)胞

中文名稱(chēng)：小鼠T淋巴細(xì)胞

生產(chǎn)特性：懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：RPMI1640+100U/ml（重組白介素-2）+10% FBS

傳代方法：1:2

傳代情況：2-3天換液/傳代

凍存條件：90% FBS+10%DMSO

支原體檢測(cè)：陰性

產(chǎn)品供應(yīng)商：上?；鄯f生物科技有限公司

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二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的*培養(yǎng)液移入廢液缸中，原瓶（T25瓶）保留6-8ml*培養(yǎng)液，懸浮細(xì)胞需離心處理，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1. 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)隔夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中，加入約6ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)隔夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2. 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)液終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，*脫落后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

2、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，進(jìn)行離心收集，1000RPM條件下離心5分鐘，去除上清，按凍存數(shù)量加入血清及DMSO，凍存比例為90%FBS+10%DMSO。

注意：

我細(xì)胞庫(kù)認(rèn)為購(gòu)買(mǎi)細(xì)胞的客戶(hù)有培養(yǎng)細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，客戶(hù)收到細(xì)胞后，嚴(yán)格按照本細(xì)胞培養(yǎng)條件更換*培養(yǎng)基。（細(xì)胞庫(kù)推薦使用的培養(yǎng)基，我?guī)焓褂玫呐囵B(yǎng)基為Gibco,血清SERANA或Gemini，雙抗Gibco，胰酶Gibco）

如果因?yàn)榭蛻?hù)缺少基本的細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)或培養(yǎng)條件而導(dǎo)致細(xì)胞各類(lèi)問(wèn)題，我?guī)旄挪回?fù)責(zé)。對(duì)于因缺少細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)和時(shí)間，建議客戶(hù)可我細(xì)胞庫(kù)代為培養(yǎng)細(xì)胞和后續(xù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。